表达水平低、溶解性和稳定性差是生产重组膜蛋白的经常面临的挑战。挑选最佳表达条件时通常只关注表达水平,蛋白稳定性表征则是单独进行的,有时是在蛋白纯化完成之后。

 

Andromeda 可以实现蛋白纯化前的表达水平与稳定性的检测,以优化表达条件,从而提高 CRO 和生物制药企业蛋白生产团队的效率。

Two Andromeda instruments side by side

Andromeda 提高您的蛋白生产团队的效率


在粗裂解液中快速筛选更多表达条件

常规的工作流程依赖于不止一种方法来筛选表达和提取条件——例如 SDS-PAGE 和 SEC 或 FSEC。 使用 Andromeda 取代这些耗时且通量低的方法。在毛细管中,  只需 11 分钟,即可分析多达  48  种粗裂解液,样品预处理非常简单,因此您可以更快地进入放大和纯化阶段。


单次检测,即可确定蛋白是否高表达和正确折叠

此前测量热稳定性时,需要纯化的蛋白或使用操作繁琐、通量低的 FSEC-TS 在粗裂解液中检测。 Andromeda 可以轻松识别粗裂解液中产生足够且正确折叠的蛋白的表达条件——尽早了解您的蛋白是否稳定,就不必返回筛选更多条件。


在纯化之前,即可通过热迁移实验,评估蛋白结合活性

在生产用于亲和力筛选研究的靶标蛋白时,我们希望能够得到足够数量的结构稳定的产品。在小规模表达过程中,如果粗裂解物中存在配体,Andromeda 可快速评估蛋白热稳定性。

在蛋白药物生产流程中使用 Andromeda

作为蛋白生产团队成员,您的工作是为生物物理表征、亲和筛选和结构生物学研究组提供高质量的靶蛋白。通常,他们会对蛋白的质量进行测试——当质量没有达到期望时,您的团队将收到负面反馈。

且看 Andromeda 如何助力您的蛋白生产流程。

 


无需重复表达筛选,节省时间

如果您及早知道蛋白的稳定性,您就可以纯化最稳定的靶蛋白,省去重新筛选的麻烦。


更快地交付高质量蛋白

单次检测,即可监测蛋白表达水平和热稳定性,缩短将纯化蛋白交付给结构生物学、生物物理学或筛选团队的周期。


在小规模表达阶段做出明智的决定

不仅要尽早评估表达水平,还要评估稳定性,以便您在进行纯化之前选择正确的表达条件。

Andromeda 让您的蛋白服务业务脱颖而出

无论您是蛋白服务供应商还是 CRO 公司,您对客户的承诺是以具有竞争力的价格按时提供最优质的蛋白。但是,当您需要进行多轮表达筛选、量产和昂贵的纯化来优化条件时,就很难兑现这些承诺。

以下是 Andromeda 可为您的蛋白服务带来的益处。

 


降低成本

在小规模阶段优化表达条件,无需等到量产或纯化。


为您的客户提供更短交付周期

通过一次监测多个表达条件,减少进入纯化阶段所需的时间。


在昂贵的量产或纯化之前,获取蛋白重要信息

获取蛋白表达水平及稳定性信息。


让您的蛋白服务脱颖而出

成为蛋白服务供应商中的首选。

看看 Andromeda 是否可以分析来自您的表达系统的裂解液

来自大肠杆菌表达系统的裂解液

来自哺乳动物和昆虫表达系统的裂解液

多组氨酸标签

即将上线
有更新时通知我

绿色荧光蛋白标签

即将上线
有更新时通知我

仪器、耗材和软件共同协作

Andromeda Instrument for for expression screening and stability

首先选择满足您通量需求和上样偏好的型号。开始实验前,您需要准备 毛细管。 对于带有 His 标签蛋白的裂解物,还需要准备 标记试剂盒

在软件方面,AN.Control 检测设置很简单,数据分析也很简单。 当您需要更高级的分析选项时,获取 AN.Stability Analysis 以获得跨多次运行的合并重复的即时统计和数据分析。

Andromeda


如果您想要灵活的通量,请选择 Andromeda。单次运行,可检测 1 至 48 个样本。

Andromeda Plex


如果您使用 96 孔板制备样品,Andromeda Plex 是您的最佳选择。您可使用毛细管组直接从孔板中吸取裂解液。

Andromeda 使用热变性来帮助您选择可确保蛋白稳定性的表达条件

Andromeda 通过升温过程中的荧光变化,来检测粗裂解液中蛋白热变性,荧光来自特异性标记的 His⁠-tag 蛋白或 GFP 融合蛋白。数据分析很简单:一阶导数图中的峰表示您的蛋白正确折叠。此外,热变性发生的拐点温度 (Ti) 可用于评估蛋白稳定性。不同表达条件可能会影响表达水平和稳定性,Ti 位移和峰高的组合能够告知您相对蛋白表达丰度,以及是否正确折叠。

Andromeda measures the thermal unfolding of a protein

只需一步,即可准备好您的裂解液 – 或者根本不需要任何步骤

在粗裂解液中,Andromeda 检测来自重组膜蛋白的荧光,以确定表达水平和稳定性。

对于 GFP 融合蛋白,只需用毛细管吸取裂解液即可直接测量。 对于 His⁠-⁠tag 蛋白,只需使用 1-step Andromeda His⁠-⁠tag labeling kit ,即可进行位点特异性和免纯化标记。 以上就是全部的样品制备步骤,现在您可以开始测量了!


 

获取有关表达水平、稳定性和配体结合的信息

从 Andromeda 的数据中可以了解很多关于您的重组蛋白的信息——因此您可以选择稳定且更有可能发挥功能的候选蛋白进行纯化。以下是数据可以告诉您的内容概述。

比较从不同表达条件(如:生长培养基或温度)收集的裂解液峰值,来选择折叠重组蛋白高表达的条件。

Andromeda Expression Screening Graph

通过一阶导数峰值的位移,寻找稳定蛋白的条件。

结合热位移分析,来检测蛋白与配体的结合活性。

Andromeda uses shifts in the first derivative peaks to find out which conditions stabilize your protein

筛选最佳的大肠杆菌菌株

 去折叠检测结果为至少3个技术重复的平均值。
阴影区域表示技术重复之间的标准偏差。

去折叠检测结果为至少3个技术重复的平均值。 阴影区域表示技术重复之间的标准偏差。

在天然宿主以外的微生物中表达蛋白时,可能会出现各种问题。可以使用具有增强能力的基因工程大肠杆菌菌株,以克服毒性或转化效率低的问题。
在实验中,使用了三种菌株表达 His⁠-⁠tagged HRV3C。

之后我们通过 Andromeda 检测了表达有 His-tagged HRV3C 的三种大肠杆菌菌株的澄清裂解液,以确定哪种菌株产生了高表达水平的正确折叠蛋白。一阶导数曲线显示菌株之间正确折叠蛋白的产量存在差异,并表明菌株 Rosetta2 (DE3) pLysS 中稳定的 His-tagged HRV3C 表达水平最高。

查阅 technical note 了解其他表达筛选,以及与 SDS-PAGE 的对比.

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