使用Dianthus表征PROTAC二元和三元复合物
如果您正在从事蛋白降解靶向嵌合体（PROTACs）开发，找到正确的方法来表征二元和三元复合物是极为关键的。您需要新的方法来突破SPR，FRET和AlphaScreen技术的局限性。这种方法将具有以下特点：溶液内检测、不依赖分子量变化、无需繁琐的方法开发。
Dianthus可针对二元和三元复合物亲和力筛选中的主要障碍提供解决方法
对二元复合物的固定导致三元复合物研究变得极为复杂
这是由于采用SPR等需要固定的方法在检测三元结合时，二元复合物固定后无法确保其稳定性。
解决方法
Dianthus直接在溶液内进行检测，结合平衡状态可控。因此，在表征三元结合的过程中二元复合物可保持稳定。
SPR在检测小分子结合时存在巨大挑战
如果采用基于显著分子量变化的方法检测PROTAC分子中的目的蛋白（POI）配体即warheads，或泛素连接酶配体等小分子，您可能要耗费大量精力进行方法开发。
解决方法
Measurements of molecular interactions with Dianthus are mass-independent, so you use the same technology from primary screening of fragments to affinity maturation of lead candidates for your degraders �� like the interaction between warhead and POI, E3 ligands, and E3 ligases, and later between PROTAC and POI and PROTAC and E3 ligase.
共价结合配体研发中的挑战
由于SPR传感器芯片很多情况下不能再生和重复利用，所以用SPR技术来筛选共价配体会消耗过多人力和实验成本。共价结合配体可以提升与靶蛋白的亲和力和细胞摄取，因此研究人员对开发共价配体（可逆和非可逆）的兴趣越来越大，SPR芯片不能再生利用的这个弊端也越来越显而易见。
解决方法
由于Dianthus是在溶液内单独检测每一组分子间的相互作用，筛选大量的共价结合配体完全不成问题
生化方法检测流程冗长
基于空间距离的生化检测方法如AlphaScreen或TR-FRET需要对多个孵化步骤进行细致优化。此外，此类方法还需要使用两种不同的荧光基团来标记POI（TR-FRET）或分别标记供体或受体微球（AlphaScreen）
解决方法
Dianthus对二元和三元复合物的表征仅需两个步骤、一种荧光基团 （用于标记POI或泛素连接酶），且无需使用微球。
化合物和样品量有限
SPR和FRET等方法在筛选时需要大量的样品和化合物
解决方法
光谱位移技术无需大量方法开发且样品消耗量很低，因此POI和小分子配体的用量很少。
找到兼顾片段化合物筛选和片段优化的方法
从片段化合物库发现结合分子并将其开发为warheads的方式越来越受到欢迎。需要使用与SPR或NMR不同，亲和力检测范围广并且不依赖分子量变化的生物物理方法。
解决方法
您完全可以信赖Dianthus从片段化合物库中发现的hits, 因为它使用不依赖分子量变化的检测方式，且亲和力检测范围广。因此, Dianthus非常适用于hits筛选并将其优化为亲和力更强的warheads。用高质量的数据
表征二元复合物中的分子间相互作用
SD-36是一种在临床前模型中显示存在抗肿瘤活性的高效特异性PROTAC分子。采用光谱位移技术分别检测SD-36与STAT3和CRBN泛素连接酶的亲和力，并获得了高质量数据( 信噪比S/N值>30）
检测由共价结合PROTAC形成的高亲和力三元复合物
当您需要检测由共价结合配体参与的分子间相互作用时，在溶液中直接检测的方法相比基于固定的方法要简单得多。光谱位移技术检测到共价结合PROTAC分子LC-2对泛素连接酶复合物VCB的亲和力在结合靶蛋白KRAS后（蓝色曲线, 三元结合）相比未结合KRAS（紫色曲线，二元结合）提高了80倍。更高的亲和力对应高协同效应（α值），从而表明LC-2是有巨大潜力的KRAS蛋白降解剂。
高度协同的三元复合物的钩状效应评估
目标蛋白必须通过评估三元复合物的形成、协同性和钩状效应，以确保有效的泛素化和降解。利用Dianthus测量二元和三元复合物在溶液中的结合亲和度，方便计算协同性，并以高质量的数据揭示钩状效应。
The binary and ternary complex formed by BRD2, PROTAC MZ1, and ligase VCB were characterized by Spectral Shift. The affinity of BRD2 + MZ1 (Kd = 18.8 nM) was determined first. Under assay conditions that revealed the hook effect, 57 nM of MZ1 resulted in maximum ternary complex formation. Positive cooperativity ( α = 9.3) — which is known to correlate with efficient ubiquitination and target degradation — correlates with previously published data.
